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El paciente se trata después con el ligando de 4Ig-B7-H3. Preferiblemente, la etapa de determinar si las células cancerosas de dicho sujeto expresan un polipéptido 4Ig-B7-H3 se lleva a cabo en una muestra tumoral derivada de un paciente. Por ejemplo, la muestra puede ser una biopsia del tumor del paciente, un cultivo de células o tejidos, etc. Tal muestra se puede obtener mediante métodos convencionales. Algunas de estas aproximaciones son especialmente adecuadas para determinar una secuencia polipeptídica o nivel de expresión, tal como la transferencia de Northern, ELISA y RIA.

Se pueden usar diferentes tipos de ligandos, tales próstata psa psma b7- h3 ar 10 anticuerpos específicos. En una realización específica, la muestra se pone en contacto con un anticuerpo específico para un polipéptido 4Ig-B7-H3, y se determina la formación de un complejo inmunitario. En el contexto de esta invención, un anticuerpo designa un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, así como fragmentos o derivados de los mismos que tienen sustancialmente la misma especificidad por el antígeno.

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Los derivados incluyen anticuerpos de cadena simple, anticuerpos humanizados, anticuerpos poli-funcionales, etc. Cualquiera de los anticuerpos específicos de 4Ig-B7-H3 descritos en la presente memoria es adecuado para su uso. En una realización específica, el método comprende poner en contacto una muestra del sujeto con un soporte revestido con un anticuerpo específico para un próstata psa psma b7- h3 ar 10 4Ig-B7-H3, y determinar la presencia de un complejo inmunitario.

Una realización particular comprende poner en contacto una muestra tumoral del paciente con un cebador o sonda específica de 4Ig-B7-H3, y determinar la existencia de un híbrido o producto de amplificación.

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La presencia o cantidad de mARN de 4Ig-B7-H3 en una muestra puede proporcionar una indicación relacionada con la expresión de dicho receptor. Tal determinación se puede llevar a cabo mediante diversas técnicas conocidas en la técnica, que incluyen RT-PCR.

Tal tratamiento puede incluir, por ejemplo, una lisis de las células o del tejido p. En otro aspecto, la presente descripción proporciona anticuerpos producidos mediante el uso de cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria.

La descripción también abarca los fragmentos y derivados de los anticuerpos que tienen sustancialmente la misma especificidad y actividad hacia el antígeno p. En otro aspecto, cualquier método anteriormente mencionado que implica un anticuerpo que se une a un próstata psa psma b7- h3 ar 10 4Ig-B7-H3 se puede llevar a cabo con anticuerpos 5B14 oo con anticuerpos que compiten con ellos.

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Opcionalmente, un anticuerpo que compite con el anticuerpo 5B14 o no es el anticuerpo 5B14 o propiamente dicho, respectivamente. Preferiblemente, dichos anticuerpos son anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, o anticuerpos humanos.

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La expresión "compite con", cuando se refiere a un anticuerpo monoclonal particular p. Por ejemplo, si un anticuerpo reduce la unión de 5B14 o a una molécula 4Ig-B7-H3 en un ensayo de unión, el anticuerpo "compite" con 5B14 o Un anticuerpo que "compite" con 5B14 o puede competir con 5B14 o por la unión a la molécula 4Ig-B7-H3 humana.

En otra realización, la descripción comprende un anticuerpo que se une a un polipéptido 4Ig-B7-H3, en el que el anticuerpo es 5B14 o También se describe una célula hospedadora, en particular un hibridoma que produce cualquiera Adelgazar 50 kilos los anticuerpos anteriormente mencionados. En general, se pueden usar los anticuerpos tanto policlonales como monoclonales hacia 4Ig-B7-H3 en una diversidad de realizaciones.

Por ejemplo, se pueden emplear en protocolos de clonación de anticuerpos para obtener cADNs o genes que codifican otros 4Ig-B7-H3. También se pueden usar en estudios de inhibición para analizar el efecto de los péptidos relacionados con 4Ig-B7-H3, en especial un receptor de 4Ig-B7-H3 hallado en las células NK, en células o animales.

En un aspecto, el equipo comprende al menos un anticuerpo próstata psa psma b7- h3 ar 10 y al menos un anticuerpo terapéutico p. En otro aspecto, el anticuerpo diagnóstico y el anticuerpo terapéutico se unen de manera específica al mismo receptor de las células NK. Se tiñeron diferentes líneas celulares de neuroblastoma con mAb 5B14 o mAbs hacia las moléculas indicadas, seguido de un segundo reactivo próstata psa psma b7- h3 ar 10 de isotipo anti-ratón de cabra conjugado a PE y se analizaron mediante citometría de flujo.

Los perfiles blancos indican las células incubadas con el segundo reactivo solamente. En el fondo, fragmentos que muestran cierta inmunotinción. Figura 4. Se indican los marcadores de los pesos moleculares kD. Figura 5. Obsérvese que las células de neuroblastoma fueron sumamente homogéneas, tal como se indica por el hecho de que las moléculas 4Ig-B7-H3 y GD2 fueron expresadas perdiendo peso toda la población celular citometría de flujo de NB1 y NB2 en el panel B, derecha.

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Figura 6. Los datos son representativos de 4 experimentos independientes. Figura 7: Muestra la Tabla 1, la reactividad superficial del mAb 5B14 en diferentes tipos de células. La presente descripción proporciona métodos nuevos para producir y usar anticuerpos adecuados para el diagnóstico y el tratamiento de trastornos proliferativos, en particular tumores, trastornos inflamatorios y trastornos inmunoproliferativos.

Esta potenciación de la actividad de las células NK tiene una amplia diversidad de aplicaciones terapéuticas. La potenciación de próstata psa psma b7- h3 ar 10 células NK puede ser beneficiosa para el tratamiento de trastornos proliferativos tales como tumores, así como enfermedades infecciosas y trastornos inflamatorios. También se ha demostrado que la potenciación de las células NK da como resultado una eficacia incrementada de los anticuerpos terapéuticos, en particular los anticuerpos capaces de inducir la destrucción celular mediada por ADCC de una célula objetivo a la que se unen por ejemplo, anticuerpos que se unen a antígenos tumorales.

En la presente memoria se discute próstata psa psma b7- h3 ar 10 una diversidad de tales anticuerpos terapéuticos. El compuesto que selecciona como objetivo las células que expresan 4Ig-B7-H3 puede actuar por medio de cualquier mecanismo adecuado, p.

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En general, los presentes métodos que se refieren a la selección como objetivo de las células que expresan 4Ig-B7-H3 implica el uso de anticuerpos monoclonales específicos para 4Ig-B7-H3. De manera ventajosa, se usan dos grupos de anticuerpos.

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Un grupo, que comprende anticuerpos marcados directamente o indirectamente, tienen una naturaleza de diagnóstico, y se usan para determinar si 4Ig-B7-H3 se expresa en las células p. El segundo grupo, usado para el tratamiento, corresponde a anticuerpos monoclonales que se generan en general en un animal que no es un ser próstata psa psma b7- h3 ar 10, pero que se han hecho adecuados para el uso en seres humanos, p. En ciertas realizaciones, los anticuerpos se derivatizan adicionalmente con agentes citotóxicos, directamente o indirectamente, de manera que destruyen las células que expresan 4Ig-B7-H3.

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Próstata psa psma b7- h3 ar 10 ejemplo, los anticuerpos se pueden unir a isótopos radiactivos, polipéptidos citotóxicos, o moléculas pequeñas citotóxicas. Tal como se usa en la presente memoria, los siguientes términos tienen los significados atribuidos a ellos, a menos que se especifique de otra manera.

Se puede usar cualquiera de estas características y actividades para identificar células NK, mediante el uso de métodos muy conocidos en la técnica. Tal como se usa en la presente memoria, "estado de 4Ig-B7-H3" se refiere a la identidad y la prominencia de la proteína 4Ig-B7-H3 expresada en células en proliferación o en otras células p. El término "anticuerpo", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a anticuerpos policlonales y monoclonales.

Algunas de estas se dividen adicionalmente en subclases.

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Próstata psa psma b7- h3 ar 10 expresiones cadena ligera variable VL y cadena pesada variable VH se refieren a estas cadenas ligeras y pesadas, respectivamente. Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan "alfa", "delta", "épsilon", "gamma" y "mu", respectivamente.

Las estructuras de las subunidades y las configuraciones tridimensionales de las diferentes clases de inmunoglobulinas son muy conocidas. Preferiblemente, el anticuerpo de esta invención es un anticuerpo monoclonal.

Próstata psa psma b7- h3 ar 10 anticuerpos especialmente preferidos son los anticuerpos humanizados, quiméricos, humanos, o de otra manera adecuados para seres humanos.

Los "anticuerpos" también incluyen cualquier fragmento o derivado de cualquiera de los anticuerpos descritos en la presente memoria. La expresión "se une de manera específica a" significa que un anticuerpo se puede unir preferiblemente en un ensayo de unión competitiva a la molécula de unión, p.

Un anticuerpo "adecuado para seres humanos" se refiere a cualquier anticuerpo, anticuerpo derivatizado, o fragmento de anticuerpo que se puede usar como seguridad en seres humanos, p. Los péptidos o moléculas pequeñas "tóxicas" o "citotóxicas" abarcan cualquier compuesto que puede frenar, detener, o invertir la proliferación de las células, disminuir su actividad p.

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Los compuestos tóxicos o citotóxicos pueden funcionar, por ejemplo, destruyendo las células mediante la inducción de ADCC, provocando la apoptosis o de otra manera. Un anticuerpo "humano" es un anticuerpo próstata psa psma b7- h3 ar 10 de ratones transgénicos o de otros animales que se han "modificado" para producir anticuerpos humanos específicos en respuesta a una exposición antigénica véase, p. Perdiendo peso se puede construir un anticuerpo completamente humano mediante métodos de transfección genéticos o cromosómicos, así como mediante la tecnología de expresión en fagos, todos los cuales se conocen en la técnica véase, p.

Los anticuerpos humanos se pueden generar también mediante células B activadas in vitro véanse, p.

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Un anticuerpo humano se puede obtener también determinando la secuencia de un anticuerpo aislado a partir de un ser humano y expresando una secuencia nucleotídica que codifica dicho anticuerpo a partir de una célula hospedadora recombinante en próstata psa psma b7- h3 ar 10 cultivo celular.

La pureza y la homogeneidad se determinan en general mediante el uso de técnicas de química analítica tales como la electroforesis en gel de poliacrilamida o la cromatografía líquida de alto rendimiento.

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Adelgazar 15 kilos expresión "muestra biológica", tal como se usa en la presente memoria, incluye, pero sin limitación, un líquido biológico por ejemplo suero, linfa, sangremuestra celular o muestra tisular por ejemplo, médula ósea. El término "recombinante", cuando se usa con referencia, próstata psa psma b7- h3 ar 10. Así, por ejemplo, las células recombinantes expresan genes que no se hallan en la forma nativa no recombinante de la célula, o expresan genes nativos que se expresan por próstata psa psma b7- h3 ar 10 parte de manera anormal, que se expresan en menor medida o que no se expresan en absoluto.

La presente descripción implica la producción y el uso de anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, o derivados de anticuerpos que son adecuados para el uso en seres humanos y que seleccionan como objetivo la proteína 4Ig-B7-H3 o la proteína 4Ig-B7-H3R.

Los anticuerpos de esta descripción se pueden producir mediante cualquiera de una diversidad de métodos conocidos en la técnica. En general, se producen mediante la inmunización de un animal no humano, preferiblemente un ratón, con un inmunógeno que comprende una proteína 4Ig-B7-H3 o 4Ig-B7-H3R presente en la superficie de las células NK o las células objetivo. En una realización específica, el inmunógeno comprende células NK o células objetivo intactas, en particular células NK o células objetivo humanas intactas, opcionalmente tratadas próstata psa psma b7- h3 ar 10 lisadas.

Tales anticuerpos se pueden marcar directamente próstata psa psma b7- h3 ar 10 indirectamente es decir, usarlos con un anticuerpo secundario marcado para el uso como anticuerpos diagnósticos para la etapa de tipificación descrita en la presente memoria para determinar el estado de 4Ig-B7-H3 de los pacientes.

Los presentes anticuerpos diagnósticos o terapéuticos p. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen los fragmentos Fab, Fab', Fab'-SH, F ab' 2, y Fv; diacuerpos; moléculas Fv de cadena simple scFv ; polipéptidos de cadena simple que contienen solamente un dominio variable de la cadena ligera, o un fragmento del mismo que contiene Dietas faciles tres CDRs del dominio variable de la cadena ligera, sin un resto de la cadena pesada asociado; los polipéptidos de cadena simple que contienen solamente una región variable de la cadena pesada, o un fragmento de la misma que contiene las tres CDRs de la región variable de la cadena pesada, sin un resto de la cadena ligera asociado; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.

Tales fragmentos y derivados y métodos para prepararlos se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, se puede usar pepsina para digerir un anticuerpo por debajo de las uniones disulfuro en la región de la bisagra para producir F ab '2, un dímero de Fab que es él mismo una cadena ligera unida a VH-CH1 mediante un enlace disulfuro.

El F ab '2 se puede reducir en condiciones suaves para romper la unión disulfuro en la región de la bisagra, por lo que se convierte el dímero F ab '2 en un monómero Fab'. El monómero Fab' es esencialmente Fab con parte de la región de la bisagra véase Fundamental Immunology Paul ed. Las técnicas para la producción de anticuerpos de cadena simple Pat.

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De manera alternativa, se puede usar la tecnología de expresión en fagos para identificar anticuerpos y fragmentos Fab heterodiméricos que se unen específicamente a antígenos seleccionados véase, p. En una realización, el método comprende seleccionar, de una biblioteca o un repertorio, un anticuerpo monoclonal o un fragmento o derivado del mismo que reacciona de manera cruzada con al menos un receptor de NK.

Por ejemplo, el repertorio puede ser cualquier repertorio recombinante de anticuerpos o fragmentos de los mismos, opcionalmente expresado por cualquier estructura próstata psa psma b7- h3 ar 10 p. La etapa de inmunizar a un mamífero no humano con un antígeno se puede llevar a cabo de cualquier manera conocida en la técnica véase, por ejemplo, E.

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Próstata psa psma b7- h3 ar 10 general, el inmunógeno se suspende o se disuelve en un tampón, opcionalmente con un adyuvante, tal como adyuvante completo de Freund. Los expertos en la técnica conocen bien los métodos para determinar la cantidad de inmunógeno, los tipos de tampones y las próstata psa psma b7- h3 ar 10 de adyuvante.

De forma similar, también se conoce en la técnica la localización y la frecuencia de inmunización suficiente para estimular la producción de anticuerpos. Esto va seguido de inyecciones de recuerdo del antígeno alrededor del día 20, opcionalmente con un adyuvante tal como adyuvante incompleto de Freund.

Las inyecciones de recuerdo se llevan a cabo de manera intravenosa, y se pueden repetir durante varios días consecutivos. Esto va seguido de una inyección de refuerzo en el día 40, de manera intravenosa o intraperitoneal, en general sin adyuvante.

Este protocolo da como resultado la producción de células B productoras de anticuerpos específicos del antígeno después de alrededor de 40 días. También se pueden utilizar otros protocolos, con tal de que den Adelgazar 72 kilos resultado la producción de células B que expresan un anticuerpo dirigido al antígeno usado en la inmunización.

En otro aspecto, se aíslan los linfocitos de un mamífero no humano sin inmunizar, se cultivan in vitro, y después se exponen al inmunógeno en el cultivo celular. Crit Rev Biochem Mol Biol, vol. Clin Exp Pharmacol Physiol, vol. Cancer Metastasis Rev, vol. FEBS Lett.

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Prostate, vol. Cancer Gene Ther. Hybridoma, vol. J Clin Invest, vol. Cancer Immunol Immunother, vol. Nature Med, vol. Genetics, vol. Cell, vol. Descripción resumida de la invención La presente invención es tal como se define en las reivindicaciones que se acompañan.

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Breve descripción de las figuras Figura 1. Se utilizaron los siguientes cebadores para amplificar AI AI Se utilizaron los siguientes cebadores para amplificar R R A los largo de las subsecciones siguientes se proporcionan definiciones próstata psa psma b7- h3 ar 10. Consideraciones generales para estrategias terapéuticas Las tecnologías de transferencia de genes y terapia génica pueden utilizarse para liberar moléculas de polinucleótidos terapéuticas a células tumorales que sintetizan STEAP es decir, antisentido, ribozima, polinucleótidos que codifican intracuerpos y otras moléculas inhibidoras de STEAP.

Composiciones de diagnóstico y kits Para el uso en las aplicaciones de diagnóstico y terapéuticas descritas o sugeridas anteriormente, la invención también describe kits. Amplificación por PCR. Resultados Se realizaron varios experimentos de SSH tal y como se describe en Materiales y Métodos, supray condujeron al aislamiento de numerosos clones de fragmentos de genes candidatos.

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Construcción pcDNA3. Generación de anticuerpos policlonales pAbs Para generar pAbs para STEAP-2, se utilizaron la proteína de fusión con GST purificada y los péptidos acoplados a la hemocianina de lapa californiana KLH para inmunizar conejos individuales tal como se indica a continuación.

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Métodos terapéuticos y de diagnóstico y composiciones para determinar 4Ig-B7-H3 y su receptor homólogo en las células NK.

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Se indican los marcadores de los pesos moleculares kD. Figura 5. Obsérvese que las células de neuroblastoma fueron sumamente homogéneas, tal como se indica por el hecho de que las moléculas 4Ig-B7-H3 y GD2 fueron expresadas por toda la población celular citometría de flujo de NB1 y NB2 en el panel B, derecha. Figura 6. Los datos son representativos de 4 experimentos independientes.

Figura 7: Muestra la Tabla 1, la reactividad superficial del mAb 5B14 en diferentes tipos de células. La presente descripción proporciona métodos nuevos para producir y usar anticuerpos adecuados para el diagnóstico y el tratamiento de trastornos proliferativos, en particular tumores, trastornos inflamatorios y trastornos inmunoproliferativos. Esta potenciación de la actividad de las células NK tiene una amplia diversidad de aplicaciones terapéuticas. La potenciación de las células NK puede ser beneficiosa para el tratamiento Adelgazar 20 kilos trastornos proliferativos tales como tumores, así como enfermedades infecciosas y trastornos.

También se ha demostrado que la potenciación de las células NK da como resultado una eficacia incrementada de los anticuerpos terapéuticos, en particular los anticuerpos capaces de inducir la destrucción celular mediada por ADCC de una célula objetivo a la que se unen por ejemplo, anticuerpos que se unen a antígenos tumorales.

En la presente memoria se discute adicionalmente una diversidad de tales anticuerpos terapéuticos. El compuesto que selecciona como objetivo las células que expresan 4Ig-B7-H3 puede actuar por medio de cualquier mecanismo adecuado, p.

En general, los presentes métodos que se refieren a la selección como objetivo de las células que expresan 4Ig-B7-H3 implica el uso de anticuerpos monoclonales específicos para 4Ig-B7-H3. De manera ventajosa, se usan dos grupos de anticuerpos. Un grupo, que comprende anticuerpos marcados directamente o indirectamente, tienen una naturaleza de diagnóstico, y se usan para determinar si 4Ig-B7-H3 se expresa en las células p.

El segundo grupo, usado para Adelgazar 15 kilos tratamiento, corresponde a anticuerpos monoclonales que se generan en general en un animal que no es un ser humano, pero que se han hecho adecuados para el uso en seres humanos, p. En ciertos aspectos, los anticuerpos se derivatizan adicionalmente con agentes citotóxicos, directamente o indirectamente, de manera que destruyen las células próstata psa psma b7- h3 ar 10 expresan 4Ig-B7-H3.

Por ejemplo, los anticuerpos se pueden unir a isótopos radiactivos, polipéptidos citotóxicos, o moléculas pequeñas citotóxicas. Tal como se usa en la presente memoria, los siguientes términos tienen los significados atribuidos a ellos, a menos que se especifique de otra manera. Se puede usar cualquiera de estas características y actividades para identificar células NK, mediante el uso de métodos muy conocidos en la técnica.

Tal como se usa en la presente memoria, "estado de 4Ig-B7-H3" se refiere a la identidad y la prominencia de la proteína 4Ig-B7-H3 expresada en células en proliferación o en otras células p. El término "anticuerpo", tal como se usa en próstata psa psma b7- h3 ar 10 presente memoria, se refiere a anticuerpos policlonales y monoclonales. Algunas de estas se dividen adicionalmente en subclases. Las expresiones cadena ligera variable VL y cadena pesada variable VH se refieren a estas cadenas ligeras y pesadas, respectivamente.

Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan "alfa", "delta", "épsilon", "gamma" y "mu", respectivamente. Las estructuras de próstata psa psma b7- h3 ar 10 subunidades y las.

Preferiblemente, el anticuerpo de esta descripción es un anticuerpo monoclonal. Los anticuerpos especialmente preferidos son los anticuerpos humanizados, quiméricos, humanos, o de otra manera adecuados para seres humanos.

  • La frase también puede describir pacientes que responden a la terapia, aunque padecen efectos secundarios, recaen, desarrollan resistencia, etc.
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Los "anticuerpos" también incluyen cualquier fragmento o derivado de cualquiera de los anticuerpos descritos en la presente memoria. La expresión "se une de manera específica a" significa que un anticuerpo se puede unir preferiblemente en un ensayo de unión competitiva a la molécula de unión, p.

Un anticuerpo "adecuado para seres humanos" se refiere a cualquier anticuerpo, anticuerpo derivatizado, o fragmento de anticuerpo que se puede usar como seguridad en seres humanos, p. Los péptidos o moléculas pequeñas "tóxicas" o "citotóxicas" abarcan cualquier compuesto que puede frenar, próstata psa psma b7- h3 ar 10, o invertir la proliferación de las células, disminuir su actividad p.

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Los compuestos tóxicos o citotóxicos pueden funcionar, por ejemplo, destruyendo las células mediante la inducción de ADCC, provocando la apoptosis o de otra manera.

Un anticuerpo "humano" es un anticuerpo obtenido de ratones transgénicos o de otros animales que se han "modificado" para producir anticuerpos humanos específicos en respuesta a una exposición antigénica véase, p.

También se puede construir un anticuerpo completamente próstata psa psma b7- h3 ar 10 mediante métodos de transfección genéticos o cromosómicos, así Adelgazar 72 kilos mediante próstata psa psma b7- h3 ar 10 tecnología de expresión en fagos, todos los cuales se conocen en la técnica véase, p. Con todo, Dengjel et al. Para desencadenar la respuesta inmunitaria celular el péptido ha de unirse a una molécula de MHC. En la reacción inmunitaria dependiente de las MHC de clase I, los péptidos no solo tienen que ser capaces de unirse a ciertas moléculas MHC de clase I expresadas por las células tumorales, también tienen que ser reconocidos por linfocitos T portadores de receptores de linfocito T específicos TCR.

Los antígenos que son reconocidos por los linfocitos T citotóxicos específicos del tumor, esto es, los epítopos, pueden ser moléculas derivadas de todo tipo de proteínas, tales como enzimas, receptores, factores de transcripción, etc.

An antigenic peptide produced by peptide splicing in the proteasome. Science Apr 23; Se han descubierto varios antígenos asociados a tumores.

Ciertos std/sti/urethritis de antígenos asociados a tumores, también denominados en la técnica como antígenos específicos de tumores, son específicos de tejido.

The genetic basis of cancer of the kidney. J Urol. Cancer Research. Ciba Found. Para que las proteínas próstata psa psma b7- h3 ar 10 reconocidas por los linfocitos T Adelgazar 10 kilos como antígenos específicos o asociados a tumor y puedan ser empleadas como tratamiento, deben cumplir ciertos prerrequisitos.

El antígeno debe ser expresado principalmente por células tumorales y no por tejidos sanos normales o, de hacerlo, debe serlo en cantidades comparativamente pequeñas. Los antígenos específicos de tumor y asociados a tumor proceden a menudo de proteínas que intervienen directamente en la transformación de una célula normal en una célula tumoral a causa de su función, por ejemplo porque intervienen en el control del ciclo celular o en la apoptosis.

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Un prerrequisito para la inducción de una respuesta de linfocitos T in vitro o in vivo es la presencia de un linfocito T dotado del correspondiente TCR y la ausencia de tolerancia inmunitaria hacia ese epítopo en particular. Por consiguiente, los TAA son el punto de partida para el desarrollo de una vacuna antitumoral.

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No obstante, la identificación de genes sobreexpresados o expresados selectivamente en tejidos tumorales o en estirpes de células tumorales humanas no aporta información precisa acerca del uso de los antígenos transcritos de esos genes en la inmunoterapia. Ello se explica porque solo una subpoblación individual próstata psa psma b7- h3 ar 10 epítopos de esos antígenos resulta adecuada para aplicaciones de ese tipo, puesto que ha de haber un linfocito T con el TCR correspondiente y la inmunotolerancia hacia ese epítopo concreto ha de ser mínima o nula.

Por tanto, es importante seleccionar sólo aquellos péptidos derivados de proteínas sobreexpresadas o selectivamente expresadas que sean presentados ligados a moléculas de MHC y que sean diana de linfocitos T funcionales.

Un anticuerpo que se une de manera específica a un polipéptido 4Ig-B7-H3 para el The classifications are assigned by a computer and are not a legal indican las células incubadas con el segundo reactivo solamente. 7. 5. 15 Anti-​PSA: ProstaRex Cáncer de próstata Anti-PSMA: MDX Cáncer de próstata.

Los linfocitos T cooperadores desempeñan un papel importante en la coordinación de la función efectora de los CTL en la inmunidad antitumoral. De esta forma, los epítopos de linfocitos T cooperadores asociados a tumores, solos o en combinación con otros péptidos asociados a tumores, pueden actuar como principios activos farmacéuticos de composiciones vacunales que estimulen las respuestas inmunitarias antitumorales.

La Fig. Las células fueron estimuladas y reestimuladas repetidamente con el péptido Próstata psa psma b7- h3 ar 10 y después incubadas con dicho péptido Pocillos 1, 2, 3 y 4 y con otro péptido irrelevante control negativo. Como control positivo se empleó PHA-Ionomicina. Las cifras indican el recuento de puntos positivos. Para la lectura las células fueron incubadas con el péptido TGFBI Pocillos 1, 2, 3 y 4 y con otro péptido irrelevante control negativo. Las secuencias que se comparan en la presente memoria pueden tener una adición o deleción por ejemplo, un hueco o similar en la alineación óptima de las dos secuencias.

La homología de secuencia se puede calcular creando una alineación con el algoritmo ClustalW, por ejemplo Nucleic Acid Res. J Immunol. Acta, La NOX1 es una enzima que responde a factores de crecimiento y que cataliza la formación de las especies reactivas de oxígeno superóxido O2— y peróxido de hidrógeno H2O2. Nature A reappraisal of the genomic organization of human Nox1 and its splice variants.

La NOX1 presenta una elevada expresión en el colon, pero su función en Adelgazar 10 kilos fisiología y la patología del colon se conoce muy poco. En los tejidos normales, la expresión de NOX1 parece ser baja en el íleon, intermedia en el colon derecho y elevada en el próstata psa psma b7- h3 ar 10 izquierdo.

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No hubo diferencias estadísticas en la expresión de NOX1 entre muestras procedentes de adenomas y adenocarcinomas de colon diferenciados o poco diferenciados. NOX1 se expresa mucho en las células epiteliales del colon, tanto en las del interior de las criptas como en las de la superficie luminal.

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J Pathol. Los adenomas y los adenocarcinomas bien diferenciados presentan la expresión de NOX1 regulada al alza. El factor nuclear NF -kappaB se activó predominantemente en células de adenoma y adenocarcinoma que expresaban NOX1 en abundancia, lo cual indica que la NOX1 podría estimular las vías antiapoptóticas que dependen del NF-kappaB en los tumores de colon Fukuyama, M.

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Overexpression of a novel superoxideproducing enzyme, NADPH oxidase 1, in adenoma and well differentiated adenocarcinoma of the human colon. Cancer Lett. Beta-catenin is essential and sufficient for skeletal myogenesis in P19 cells. J Biol Chem.

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Recientemente se ha planteado que las especies reactivas de oxígeno ROS inducen la apoptosis endotelial, fenómeno que a su vez induce la expresión de varias moléculas de adhesión para las células tumorales. Así pues, se expresa en todas las células en proliferación, especialmente en las células tumorales, y se usa como marcador para detectar la proliferación.

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Las ADN-topoisomerasas catalizan la rotura transitoria y la religazón de las dos hebras de la doble hélice de ADN, lo que las permite girar libremente una respecto a la otra, alterando de ese. Las dos isoformas de la enzima son probablemente el producto de un fenómeno de duplicación génica. Como antígeno oncofetal, la CEA se expresa durante el desarrollo del feto, pero también en el epitelio gastrointestinal del adulto, aunque en niveles bajos.

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La frase también puede describir pacientes que responden a la terapia, aunque padecen efectos secundarios, recaen, desarrollan resistencia, etc. En otro aspecto, la presente descripción proporciona anticuerpos producidos mediante el uso de cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria. La descripción también abarca los fragmentos y derivados de los anticuerpos que tienen sustancialmente la misma especificidad y actividad hacia el antígeno p. En otro aspecto, cualquier método anteriormente mencionado que implica un anticuerpo que se une a un polipéptido 4Ig-B7-H3 se puede llevar a cabo con anticuerpos 5B14 oo con anticuerpos que compiten con ellos.

Opcionalmente, un anticuerpo que compite con el anticuerpo 5B14 o no es el anticuerpo 5B14 o propiamente dicho, respectivamente. Preferiblemente, dichos anticuerpos son anticuerpos próstata psa psma b7- h3 ar 10, anticuerpos humanizados, o anticuerpos humanos. Adelgazar 20 kilos expresión "compite con", cuando se refiere a un anticuerpo monoclonal particular p.

Por ejemplo, próstata psa psma b7- h3 ar 10 un anticuerpo reduce la unión de 5B14 o a una molécula 4Ig-B7-H3 en un ensayo de unión, el anticuerpo "compite" con 5B14 próstata psa psma b7- h3 ar 10 Un anticuerpo que "compite" perdiendo peso 5B14 o puede competir con 5B14 o por la unión a la molécula 4Ig-B7-H3 humana.

En otro aspecto, la descripción comprende un anticuerpo que se une a un polipéptido 4Ig-B7-H3, en el que el anticuerpo es 5B14 o También abarca una célula hospedadora, en particular un hibridoma que produce cualquiera de los anticuerpos anteriormente mencionados. En general, se pueden usar los anticuerpos tanto policlonales como monoclonales hacia 4Ig-B7-H3 en una diversidad de aspectos.

Por ejemplo, se pueden emplear en protocolos de clonación de anticuerpos para obtener cADNs o genes que codifican otros 4Ig-B7-H3. También se pueden usar en estudios de inhibición para analizar el efecto de los péptidos relacionados con 4Ig-B7-H3, en especial un receptor de 4Ig-B7-H3 hallado en las células NK, en células o animales.

En un aspecto, el equipo comprende al menos un anticuerpo diagnóstico y al menos un anticuerpo terapéutico p.

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En otro aspecto, el anticuerpo diagnóstico y el anticuerpo terapéutico se unen de manera específica al mismo receptor de las células NK. Se tiñeron diferentes líneas celulares de neuroblastoma con mAb 5B14 o mAbs hacia las moléculas indicadas, seguido de un segundo reactivo específico de isotipo anti-ratón de cabra conjugado a Próstata psa psma b7- h3 ar 10 y se analizaron mediante citometría de flujo.

Los perfiles blancos indican las células incubadas con el segundo reactivo solamente. En el fondo, fragmentos que muestran cierta inmunotinción. Figura 4. Se indican los marcadores de los pesos moleculares kD. Figura 5. Obsérvese que las células de neuroblastoma fueron sumamente homogéneas, tal como se indica por el hecho de que las moléculas 4Ig-B7-H3 y GD2 fueron expresadas por toda la población celular citometría de flujo de NB1 y NB2 en el panel B, derecha.

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La presente descripción proporciona métodos nuevos para producir y usar anticuerpos adecuados para el diagnóstico y el tratamiento de trastornos proliferativos, en particular tumores, trastornos inflamatorios y trastornos inmunoproliferativos. Esta potenciación de la actividad de las células NK tiene una amplia diversidad de aplicaciones terapéuticas.

La potenciación de las células NK puede ser beneficiosa para el tratamiento de trastornos proliferativos tales como tumores, así como enfermedades infecciosas y trastornos. También se ha demostrado que la potenciación de las células NK da como resultado una eficacia incrementada de los anticuerpos terapéuticos, en particular los anticuerpos capaces de inducir la destrucción celular mediada por ADCC de una célula objetivo a la que se unen por ejemplo, anticuerpos que se unen a antígenos tumorales.

En la presente memoria se discute adicionalmente una diversidad de tales anticuerpos terapéuticos.

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El compuesto que selecciona como objetivo las células que expresan 4Ig-B7-H3 puede actuar por medio de cualquier mecanismo adecuado, p. En general, los presentes métodos que se refieren a la selección como objetivo de las células que expresan 4Ig-B7-H3 implica el uso de anticuerpos monoclonales específicos para 4Ig-B7-H3.

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De manera ventajosa, se usan dos grupos de anticuerpos. Un próstata psa psma b7- h3 ar 10, que comprende anticuerpos marcados directamente o indirectamente, tienen una naturaleza de diagnóstico, y se usan para determinar si 4Ig-B7-H3 se expresa en las células p.

El segundo grupo, usado para el tratamiento, corresponde a anticuerpos monoclonales que se generan en general en un animal que no es un ser humano, pero que se han hecho adecuados para próstata psa psma b7- h3 ar 10 uso en seres humanos, p.

En ciertos aspectos, los anticuerpos se derivatizan adicionalmente con agentes citotóxicos, directamente o indirectamente, de manera que destruyen las células que expresan 4Ig-B7-H3.

Por ejemplo, los anticuerpos se pueden unir a isótopos radiactivos, polipéptidos citotóxicos, o moléculas pequeñas citotóxicas. Tal como se usa en la presente memoria, los siguientes términos tienen los significados atribuidos a ellos, a menos que se especifique de otra manera.

Se puede usar cualquiera de estas características y actividades para identificar células NK, mediante el uso de métodos muy conocidos en la técnica. Tal como se usa en la presente memoria, "estado de 4Ig-B7-H3" se refiere a la identidad y la prominencia de la proteína 4Ig-B7-H3 expresada en células en proliferación o en otras células p.

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El término "anticuerpo", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a anticuerpos policlonales y monoclonales. Algunas de estas se dividen adicionalmente en subclases. Las expresiones cadena ligera variable VL y cadena pesada próstata psa psma b7- h3 ar 10 VH se refieren a estas cadenas ligeras y pesadas, respectivamente.

Los dominios constantes de la cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de inmunoglobulinas se denominan "alfa", "delta", "épsilon", "gamma" y "mu", respectivamente.

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Las estructuras de las subunidades y las. Preferiblemente, el Dietas faciles de esta descripción es un anticuerpo monoclonal. Los anticuerpos especialmente preferidos son los anticuerpos humanizados, quiméricos, humanos, o de otra manera adecuados para seres humanos.

Los "anticuerpos" también incluyen cualquier fragmento o derivado de cualquiera de los anticuerpos descritos en la presente memoria.

La expresión "se une de manera específica a" significa que un anticuerpo se puede unir preferiblemente en un ensayo de unión competitiva a la molécula de unión, p. Un anticuerpo "adecuado para seres humanos" se refiere a próstata psa psma b7- h3 ar 10 anticuerpo, anticuerpo derivatizado, o fragmento de anticuerpo que se puede usar como seguridad en seres humanos, p.

Los péptidos o moléculas pequeñas "tóxicas" o "citotóxicas" abarcan cualquier compuesto que puede frenar, detener, o invertir la proliferación de las células, disminuir su actividad p. Los compuestos tóxicos o citotóxicos pueden funcionar, por ejemplo, destruyendo las células mediante la inducción de ADCC, provocando la apoptosis o de otra manera. Un anticuerpo "humano" es un anticuerpo obtenido de ratones transgénicos o de otros animales que se han "modificado" para producir anticuerpos humanos específicos en respuesta a una exposición antigénica véase, próstata psa psma b7- h3 ar 10.

También se puede construir un anticuerpo completamente humano mediante métodos de transfección genéticos o cromosómicos, así como mediante la tecnología de expresión en fagos, todos los cuales se conocen en la técnica véase, p. Los anticuerpos humanos se pueden generar también mediante células B activadas in vitro véanse, p.

Un anticuerpo que se une de manera específica a un polipéptido 4Ig-B7-H3 para el The classifications are assigned by a computer and are not a legal indican las células incubadas con el segundo reactivo solamente. 7. 5. 15 Anti-​PSA: ProstaRex Cáncer de próstata Anti-PSMA: MDX Cáncer de próstata.

Un anticuerpo humano se puede obtener también determinando la secuencia de un anticuerpo aislado a partir de un ser humano y expresando una secuencia nucleotídica que codifica dicho anticuerpo a partir de una célula hospedadora. Tales anticuerpos se pueden marcar directamente o indirectamente es decir, usarlos con un anticuerpo secundario marcado para el uso como anticuerpos diagnósticos para la etapa de tipificación descrita en la presente memoria para determinar el estado de 4Ig-B7-H3 de los pacientes.

Los presentes anticuerpos diagnósticos o terapéuticos p.

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Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen los fragmentos Fab, Fab', Fab'-SH, F ab' 2, y Fv; diacuerpos; moléculas Fv de cadena simple scFv ; polipéptidos de cadena simple que contienen solamente un dominio variable de la cadena ligera, o un fragmento del mismo que contiene las tres CDRs del dominio variable de la cadena ligera, sin un resto de la cadena pesada asociado; los polipéptidos de cadena simple que contienen próstata psa psma b7- h3 ar 10 una región variable de la cadena pesada, o un fragmento de la misma que contiene las tres CDRs de la región variable de la cadena pesada, sin un resto de la cadena ligera asociado; y La impotencia de leer de Taylor multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.

Tales fragmentos y derivados y métodos para prepararlos se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, se puede usar pepsina para digerir un anticuerpo por debajo de las uniones disulfuro en la región de la bisagra para producir F ab '2, un dímero de Fab que es él mismo una cadena ligera unida a VH-CH1 mediante un enlace disulfuro.

El F ab '2 se puede reducir en condiciones suaves para romper la unión disulfuro en la región de la bisagra, por lo que se convierte el dímero F ab '2 en un monómero Fab'. El monómero Fab' es esencialmente Fab con parte de la próstata psa psma b7- h3 ar 10 de la bisagra véase Fundamental Immunology Paul ed.

Las técnicas para la producción de próstata psa psma b7- h3 ar 10 de cadena simple Pat. De manera alternativa, se puede usar la tecnología de expresión en fagos para identificar anticuerpos y fragmentos Fab heterodiméricos que se unen específicamente a antígenos seleccionados véase, p. En un aspecto, el método comprende seleccionar, de una biblioteca o un repertorio, un anticuerpo monoclonal o un fragmento o derivado del mismo que reacciona de manera cruzada con al menos un receptor de NK.

Por ejemplo, el repertorio puede ser cualquier repertorio recombinante de anticuerpos o fragmentos de los mismos, opcionalmente expresado por cualquier estructura adecuada p. La etapa de inmunizar a un mamífero no humano con un antígeno se puede llevar a cabo de cualquier manera conocida en la técnica véase, por ejemplo, E. Harlow y D. Lane, Antibodies: A Laboratory Manual. En general, el inmunógeno se suspende o se disuelve en un tampón, opcionalmente con un adyuvante, tal como adyuvante completo de Freund.

De forma similar, también se conoce en la técnica la localización y la frecuencia de inmunización suficiente para estimular la producción de anticuerpos. Esto va seguido de inyecciones de recuerdo del antígeno alrededor del día 20, opcionalmente con un adyuvante tal como adyuvante incompleto de Freund. Las inyecciones de recuerdo se llevan a cabo de manera intravenosa, y se pueden repetir durante varios días consecutivos. Esto va seguido de una inyección de refuerzo en el día 40, de manera intravenosa o intraperitoneal, en general sin adyuvante.

Un anticuerpo que se une de manera específica a un polipéptido 4Ig-B7-H3 para el The classifications are assigned by a computer and are not a legal indican las células incubadas con el segundo reactivo solamente. 7. 5. 15 Anti-​PSA: ProstaRex Cáncer de próstata Anti-PSMA: MDX Cáncer de próstata.

Este protocolo da como resultado la producción de células B productoras de anticuerpos específicos del antígeno después próstata psa psma b7- h3 ar 10 alrededor de 40 días. También se pueden utilizar otros protocolos, con tal de que den como resultado la producción de células B que expresan un anticuerpo dirigido al antígeno usado en la inmunización.

En otro aspecto, se aíslan los linfocitos de un mamífero no humano sin inmunizar, se cultivan in vitro, y después se exponen al inmunógeno en el cultivo celular. Para los anticuerpos monoclonales, que se prefieren para los fines de la presente descripción, la siguiente etapa es el aislamiento de células, p.

Se proporcionan ejemplos adicionales de tales ensayos en los Ejemplos y en Saunal et al. Meth Preferiblemente, los anticuerpos anti-4Ig-B7-H3 o anti-4Ig-B7-H3R no muestran una reactividad cruzada excesiva con otras proteínas no relacionadas.

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Una vez que se identifica un anticuerpo que reconoce de manera específica 4Ig-B7-H3 o 4Ig-B7-H3R, se puede ensayar en función de su capacidad de unirse a las células objetivo p.

Las células objetivo se pueden extraer de pacientes con trastornos proliferativos tales como neuroblastoma, melanoma o carcinoma, por ejemplo.

Un anticuerpo que reconoce próstata psa psma b7- h3 ar 10 manera específica 4Ig-B7-H3 se puede validar en un inmunoensayo para ensayar su capacidad de unirse a las células objetivo extraídas de pacientes con un trastorno, por ejemplo un trastorno proliferativo. Por ejemplo, se lleva a cabo una biopsia de un tumor y las células se extraen de una diversidad de pacientes, p. La capacidad de un anticuerpo dado de unirse a las células objetivo se determina después mediante el uso de métodos habituales muy conocidos para los expertos en la técnica.

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Los anticuerpos que se descubre que se unen a una porción sustancial de las células objetivo p. Para determinar la unión de los anticuerpos a las células, los anticuerpos se pueden marcar directamente o indirectamente. Cuando se marcan indirectamente, generalmente se añade un anticuerpo secundario marcado.

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La unión de los anticuerpos a las células se puede detectar después mediante el uso, p. Véase, p.

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Estos anticuerpos son así anticuerpos "neutralizantes" o "inhibitorios", en el sentido de que bloquean, al próstata psa psma b7- h3 ar 10 parcialmente y de manera detectable, la ruta de señalización inhibitoria mediada por un 4Ig-B7-H3R cuando interacciona con la molécula 4Ig-B7-H3.

La inhibición de la inhibición mediada por 4Ig-B7-H3 o 4Ig-B7-H3R de la citotoxicidad de las células NK se puede determinar mediante diversos ensayos o pruebas, tales como ensayos de unión o ensayos celulares. En un aspecto específico, la actividad neutralizante se puede ilustrar mediante la capacidad de dicho anticuerpo de reconstituir la lisis por parte de clones NK positivos para 4Ig-B7-H3R de las células objetivo positivas para 4Ig-B7-H3.

En otro aspecto específico, la actividad neutralizante del anticuerpo se define mediante la capacidad del anticuerpo de inhibir la próstata psa psma b7- h3 ar 10 de moléculas 4Ig-B7-H3 a 4Ig-B7-H3R.

La frase también puede describir pacientes que responden a la terapia, aunque padecen efectos secundarios, recaen, desarrollan resistencia, etc. En otro aspecto, la presente descripción proporciona anticuerpos producidos mediante el uso de cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria.

En un aspecto, se puede determinar la actividad inhibitoria de un anticuerpo de esta descripción en un ensayo de citotoxicidad basado en células, tal como se describe en la presente memoria. Los anticuerpos de esta descripción pueden neutralizar parcialmente o completamente la inhibición mediada por 4IgB7-H3R de la citotoxicidad de las células NK.

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